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结核分枝杆菌异烟肼耐药检测试剂盒(荧光PCR法)

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所属分类:呼吸道疾病

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结核分枝杆菌异烟肼耐药检测试剂盒(荧光PCR法)

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产品简介

产品名称】 结核分枝杆菌异烟肼耐药检测试剂盒(荧光PCR法)

包装规格】 50人份/

预期用途】

本试剂盒用于对结核患者痰液样本进行定性检测结核分枝杆菌异烟肼耐药的katG基因的第315氨基酸的基因突变(K315G>C)与InhA基因的启动子区的基因突变(-15 C>T)。

异烟肼是在1952年引入的抗结核病关键药物,是联合治疗活动性肺结核最有效的药物之一,也是治疗潜伏性肺结核的单一药物。katG是编码过氧化氢酶过氧化物酶的主要基因,当katG基因突变可促进分枝菌酸细胞壁的合成使菌体对异烟肼的耐药。katG表达与INH-MIC变化呈负相关,当katG表达减少2倍导致MIC增加略大2倍。当结核分枝杆菌InhA基因位点发生碱基插入、缺失或突变,是结核分枝杆菌对异烟肼耐药的另一个原因。2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告显示,中国INH总耐药率达28.6%,相较于2000年第四次的调查结果INH17.6%而言,异烟肼耐药涨势较快,耐药形势非常严峻。

本试剂盒针对异烟肼耐药两个常见突变位点进行检测,有助于了解患者所感染的结核分枝杆菌的耐药性,为临床用药指导提供辅助手段。具体临床应用时,临床医生需结合患者的实际情况进行判断,不能以本试剂盒检测结果作为临床诊断的唯一依据。

检验原理】

本试剂盒采用自主改进的扩增阻碍突变系统,将ARMSAmplification refractory mutation system)技术与Taqman探针相结合的方法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因的单核苷酸多态性(SNP)。分别针对野生型和突变型设计ARMS引物,由于在ARMS引物的3’末端引入更多的错配碱基,提高了野生型引物对突变型位点或突变型引物对野生型位点的识别特异性;且在体系中加入Taqman探针,Taqman探针分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’3’的外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号。检测体系中含有内参,通过内参核酸扩增是否正常对待测样本的处理过程以及检测过程进行监测。通过2管反应液和不同的荧光标记实现对结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因的两个突变位点的检测。

 

储存条件及有效期】

本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下,有效期为12个月(请于有效期内使用)。开封后,反复融次数不得多于4次,在-18℃以下的避光条件下运输,可稳定保存5天。

生产日期及失效日期见标签。

适用仪器】

ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7500Fast实时荧光定量PCR系统QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统LightCycler® 480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR雅睿MA-6000荧光定量PCR伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR伯乐CFX Opus 96实时定量PCR

样本要求】

  1. 样本采集

痰液少者,让患者在晨起后漱口,然后做深呼吸数次,将痰从肺部咳出,收集在干净容器内尽快送检。痰液多者,则先叮嘱患者轻咳,将潴留在气管内陈旧痰咳出弃去;然后深呼吸数次从肺部深处咳新鲜痰液,立即送检。无痰者,可去医院进行雾化吸入法引痰,然后送检。

  1. 样本采集注意事项:样本在采集、保存和转移时避免污染。

样本安全性:所有样本均视为有潜在的感染性,操作时按国家相关标准执行。

  1. 存放

待测痰液样本在2−8℃保存不应超过24小时;−18℃以下保存不超过4个月;−70℃以下长期保存。应避免反复冻融

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