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金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

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所属分类:感染类疾病

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金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

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产品简介

【产品名称】

通用名称:金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

【包装规格】  20人份/

50人份/

【预期用途】

本试剂盒用于体外定性检测人痰液样本、皮肤和软组织感染样本、全血样本中的金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸。其中痰液样本检测用于医疗机构对住院病人包括重症监护病人、手术病人及长期护理病人等MRSA院内感染的预防和控制;皮肤和软组织感染样本检测用于结合其他实验室检测如微生物培养等辅助诊断MRSA/SA的皮肤和软组织感染;全血样本检测用于临床需进行血培养检测的患者MRSA/SA感染的辅助诊断等。

葡萄球菌属是医院感染的重要致病菌之一,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureusSA)也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌代表,能产生多种毒素和侵袭性酶,该菌具有分布广泛、致病性强、耐药率高等特点。耐热核酸酶基因(nuc)为金黄色葡萄球菌的高度保守基因。

近年来由于激素、免疫制剂的大量使用以及广谱抗生素的滥用,葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)引起的医院感染呈上升趋势,2019年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)全国平均检出率为30.2%MRSA分为医疗机构相关性MRSAHA-MRSA)、社区相关性MRSA (CA-MRSA )和家畜相关性(LA-MRSA)。CA-MRSA HA-MRSA LA-MRSA在微生物学、细菌耐药(如HA-MRSA相较于CA-MRSA表现出更多多重耐药)及临床特点方面(如感染部位)有较大差异,根据这些特点可以将两者进行区分。但由于人员在医院和社区间不断流动,CA-MRSA HA-MRSA 的差异日渐缩小。MRSA具有多重耐药性,不仅对β-内酰胺类抗菌药物耐药,也对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类药物都表现出不同程度的耐药,其对不同抗菌药物的耐药率存在较大的地域差异,并有不同的变化趋势。

甲氧西林耐药mecA基因在葡萄球菌耐药中起决定性作用,该基因承载在独特的移动遗传元件(SCCmec)上,其编码的青霉素结合蛋白2aPBP2a)与β内酰胺类抗菌药物的亲和力极低,使抗菌药物不能阻碍细胞壁肽聚糖层合成,从而产生耐药性。

本试剂盒可用于金黄色葡萄球菌及其耐甲氧西林菌株感染的辅助诊断及疗效监控;检测结果仅供临床参考,最终诊断应紧密结合其他临床指标综合考虑。

【检测原理】

本试剂盒采用Taqman荧光探针法,针对金黄色葡萄球菌nuc基因和甲氧西林耐药mecA基因的高度保守且特异性区域,设计荧光检测的引物探针。mecA基因探针标记FAM荧光基团,nuc基因探针标记CY5荧光基团,探针3’端都标记淬灭基团。检测扩增过程中,特异性引物和探针与靶序列结合,通过Taq酶的DNA聚合酶活性和5’-3’外切酶活性实现PCR产物形成与荧光信号累积完全同步,实现对样本中金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药基因的定性检测。UDG酶可将扩增产物中出现的“残留污染物”水解产生脱嘧啶嘌呤位点,在进行PCR 预变性时DNA 链在这些位点发生断裂,失去模板的功能,然后通过预变性能够将反应体系中的UDG 灭活,从而避免扩增产物的污染。

试剂盒含有人源性内参,内参探针标记VIC荧光基团,探针3’端标记淬灭基团。作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控,避免检测结果假阴性。

 

【储存条件及有效期】

储存条件:本试剂盒应避光储存于-18℃以下,有效期12个月;避免反复冻融(冻融次数不多于4次);

          开封后应放入-18℃以下冻存,若置于2~8℃保存,请于1周内使用。

运输条件:试剂盒置于含干冰的运输箱中可稳定保存5天。

生产日期、生产批号及失效日期见标签。

【适用仪器设备】

ABI7500荧光定量PCR仪、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR仪、雅睿MA-6000荧光定量PCR仪、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪和伯乐CFX Opus 96实时定量PCR仪。

【样本要求】

  1. 样本类型:痰液、皮肤和软组织感染样本、全血样本。
  2. 样本采集:

2.1痰液:用无菌采样管取1~3mL受检者肺深部咳出痰液密闭送检,标本可立即用于测试。

2.2皮肤和软组织感染样本:用无菌生理盐水清洗患者伤口,然后用无菌棉拭子在伤口处取分泌物,密封于无菌试管内。

2.3 全血样本:新鲜采集的EDTA抗凝血液。

3. 注意事项:样本在采集、保存和转移时避免污染;

样本采集前24小时内禁止使用任何抗生素类药品(药膏、喷剂、滴剂);

所有样本均视为有潜在的感染性,操作时按国家相关标准执行。

4.样本存放:待测样本可2~8℃保存7天,-18℃以下保存不超过4个月,-70℃以下长期保存。待测           冷冻样本提取应当在样本完全融解后混匀进行,应避免反复冻融。提取后的DNA样本若不用于即时检测,应放置于-18℃以下,保存期限不超过3个月,反复冻融次数不超过4次。

 
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