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人类NDRG4、SEPT9、SFRP2 、BMP3、SDC2基因甲基化检测试剂盒(荧光PCR法)

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所属分类:药物基因个性化检测

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人类NDRG4、SEPT9、SFRP2 、BMP3、SDC2基因甲基化检测试剂盒(荧光PCR法)

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产品简介

产品名称 人类NDRG4/SEPT9/SFRP2/BMP3/SDC2基因甲基化检测试剂盒(荧光PCR法)

包装规格 24人份/盒、48人份/

预期用途

本产品用于体外定性检测人粪便样本中肠道脱落细胞的NDRG4/SEPT9/SFRP2/BMP3/SDC2基因的甲基化状态。

本产品适用于临床医师建议做肠镜检查患者的辅助诊断,不能作为肿瘤早期诊断或确诊的依据。检测结果仅供临床参考,具体临床应用时,临床医生必须结合病例实际情况判断。

成人每天都会有108 以上的肠上皮细胞从肠壁脱落,并通过大肠蠕动随粪便排出体外,而肿瘤细胞由于增生异常更容易从肠道脱落,因此肠道肿瘤患者的粪便中包含有大量的病变细胞及异常的细胞组分,这是粪便检测稳定的物质基础[1]。研究发现,基因启动子的甲基化修饰是肿瘤发生的早期事件,从结直肠癌患者粪便样本中获得的遗传物质可以更早的反应肠道是否存在癌变情况[2]

NDRG4也被称为SMAP-8 BDM1, NDRG基因家族的四个成员 (NDRG1-4)之一,这组基因已经证实和细胞增殖、分化、发育和胁迫相关[3]NDRG4甲基化已被证实是一种潜在的无创性检测粪便样本结直肠癌的生物标志物[4]

SEPT9Septin基因家族的一个成员,该基因家族至少有 13 个基因组成,它们编码保守的 GTPase 结构域,可以结合细胞骨架相关的蛋白质,和细胞分裂与肿瘤发生相关。研究发现,在肠癌患者粪便样本中甲基化的Septin9 基因含量特征性增高[5]

分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related proteins, sFRPs)是一种可溶性蛋白质,因其结构与Wnt信号的卷曲蛋白(frizzled, Fz)受体高度同源而被认为是一类Wnt通路拮抗剂[6]SFRP 基因的失活导致与结直肠癌相关的 Wnt 信号的失控激活[7]。目前,粪便中SFRP2甲基化可以作为诊断结直肠癌的无创生物标志物[8,9] 

BMP3TGF-B超家族的成员,通过诱导和塑造早期骨骼形成,因此在胚胎发育中发挥重要作用。在结直肠癌中高甲基化,可以作为重要的肿瘤标志物[10]

SDC2 是一种细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,参与调节许多生理过程和病理过程,生理过程包括细胞增殖、分化、粘附、细胞骨架组织、迁移、伤口愈合、细胞-基质通讯、血管生成;病理过程包括炎症和癌症[11]SDC2 基因在结直肠癌组织中的甲基化水平显著高于正常组织[12]

检验原理

本试剂盒主要包含提取转化和荧光PCR 两个步骤:提取转化步骤是用磁珠捕获的方法提取人粪便样本中的肠脱落细胞基因组DNA;然后用亚硫酸盐进行转化未发生甲基化的DNA,发生甲基化的DNA则不会被亚硫酸盐转化。荧光PCR 步骤是通过使用多重荧光PCR 的方法在一个反应孔中检测甲基化的NDRG4基因(VIC/HEX通道)、SEPT9 基因(ROX通道)及ACTB 基因(CY5通道)保守序列,另一个反应孔中检测甲基化的SFRP2基因(VIC/HEX通道)、BMP3基因(ROX通道)、SDC2基因(FAM通道)及ACTB 基因(CY5通道)保守序列。

ACTB 基因作为内参基因用来评估样品DNA 是否足量以及样品DNA 质量是否合格。

 

储存条件及有效期

本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下,有效期为9个月(请于有效期内使用)。开封后,反复融次数不得多于4次,在-18℃以下的避光条件下运输,可稳定保存5天。

生产日期及失效日期见标签。

适用仪器

QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler®480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR仪和雅睿MA-6000荧光定量PCR仪。

样本要求                                                       

  1. 样本采集

1.1 粪便样本

使用粪便采集器采集疑似感染患者的粪便样本于一次性无菌容器中,盖紧管盖。标本量要求:

固态样本:采集量约为直径2cm左右的小球大小。

液态样本:采集量约为5mL

  1. 存放

待测样本在2-8℃保存不超过7天,-18℃以下保存不超过4个月,-70℃以下长期保存,样本应避免反复冻融。

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