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人K-ras基因8种突变检测试剂盒

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所属分类:药物基因个性化检测

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人K-ras基因8种突变检测试剂盒

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0513-80562880
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产品简介

产品名称 K-ras基因8种突变检测试剂盒(荧光PCR法)

包装规格 24人份/盒、48人份/

预期用途

该产品用于体外定性检测人石蜡包埋病理切片组织中提取DNAK-ras基因1213密码子8种突变(表1)。

1 K-ras基因12号密码子6种突变型、13号密码子2种突变型

Mutation

密码子

Base Change 

突变率

Mutation

密码子

Base Change 

突变率

Gly12Ala

12

GGT>GCT

1.12%

Gly12Ser

12

GGT>AGT

0.94%

Gly12Asp

12

GGT>GAT

7.02%

Gly12Val

12

GGT>GTT

4.75%

Gly12Arg

12

GGT>CGT

0.67%

Gly13Asp

13

GGC>GAC

2.53%

Gly12Cys

12

GGT>TGT

2.33%

Gly13Cys

13

GGC>TGC

0.17%

突变率统计来源于Sanger数据库(http://cancer.sanger.ac.uk/cosmic

人类有17%~25%肿瘤带有突变的K-ras基因,其在肺癌患者中的突变率为15~30%,在结直肠癌患者中的突变率为20~50%(数据来源于Sanger数据库)。因为K-ras基因编码的P21蛋白位于EGFR信号通路下游,K-ras基因突变后,下游信号通路始终处于激活状态,不受上游靶向药物对EGFR的影响,导致细胞持续恶性增殖。K-ras 基因突变一般会使肺癌患者对 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂产生耐药,使结直肠癌患者对抗 EGFR 抗体类药物产生耐药[1, 2, 3]2008年美国国立综合癌症网络(NCCN)发布的结直肠癌临床实践指南指出导致K-ras处于激活状态的突变部位主要是位于外显子2的密码子1213,并推荐所有晚期转移结直肠癌患者在用药前进行K-ras突变检测[4]。因此快速、准确的检测出K-ras基因突变在临床用药指导方面具有重要意义。本试剂盒以 DNA 为检测样本,提供突变状态的定性评估,可辅助临床医生筛选出受益于靶向药物的结直肠癌、肺癌等肿瘤患者。试剂盒检测结果仅供临床参考,不应作为患者个体化治疗的唯一依据,临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。

检验原理

本检测试剂盒采用针对野生型序列的特异阻断技术与Taqman探针相结合方法检测位于人12号染色体K-ras 基因2号外显子的8种热点突变。Taqman探针分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ2。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号。K-ras检测反应液中含有的阻断成分,通过特定的 PCR 反应程序,可特异性阻断野生型扩增,突变型扩增不受影响,Taqman探针与突变型扩增产物结合,在实时 PCR 平台上实现对样品 DNA 中突变的检测。

检测体系中含有一定比例的dUTPdNTP和尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),这种酶(也称为尿嘧啶-N-糖基化酶或UNG酶)可以打断含有dUTPPCR产物,从而有效的防止PCR污染。

内参反应液选择的检测区域是人K-ras基因相对保守的区段,约150bp,作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控,即便DNA有降解,通过内参能够真实地反应体系中基因有效的DNA 量。

储存条件及有效期

本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下,有效期为9个月(请于有效期内使用)。反复融次数不得多于4次,在-18℃以下的避光条件下运输,可稳定保存5天。

生产日期及失效日期见标签。

适用仪器

ABI7500荧光定量PCRABI7300荧光定量PCR仪、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统LightCycler® 480荧光定量PCR系统、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR

样本要求                                                       

石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞,所取部分尽量在蜡块中部,石蜡切片数应不少于3张,厚度在5~10μm。且手术切除的组织应尽快在4~10%的福尔马林中固定,固定时间以8~24小时为宜;包埋前应进行彻底脱水。所用石蜡包埋病理组织或切片样品一般请选择保存尚未超过3年的样品。

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