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结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

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所属分类:呼吸道疾病

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结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

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产品简介

产品名称】

结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

包装规格】20人份/50人份/

预期用途】

适合于定性检测人临床痰液样本中的结核分枝杆菌DNA,适用于结核分枝杆菌感染的辅助诊断。检测结果仅供临床参考,最终诊断应紧密结合其他临床指标综合考虑。

结核分枝杆菌(Mycobacterium culosis),简称结核杆菌(Tubercle bacillus,简称TB),是专性需氧的一类细菌,抗酸染色阳性。无鞭毛,有菌毛,有微荚膜但不形成芽孢,其细菌壁既没有革兰阳性菌的磷壁酸,也没有革兰阴性菌的脂多糖。对人致病的结核分枝杆菌现一般认为有人型、牛型、非洲型。其致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引起的炎症,菌体成分和代谢物质的毒性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有关。致病物质与荚膜、脂质和蛋白质有关。结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入易感机体,引起多种组织器官的结核病,其中以通过呼吸道引起肺结核为最多。多发生于儿童,多表现为低热,盗汗,少量咯血等症状。继发性感染主要表现为低热,盗汗,咯血等症状;长呈慢性发病,少数急性发作。结核病是全球人类十大死因之一。2018 年,全世界大约有1000 万人感染过结核分枝杆菌,其中大约有160 万人死亡,我国是结核病高负担国家,发病率位居全球第二。

IS6110是由Thierry等人于1990年在结核分枝杆菌中发现的一段插入的核苷酸顺序。IS6110存在于结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗基因中的一段具有多个拷贝的序列。IS6110在其存在的菌株中是比较稳定的,在菌株产生耐药突变时都不会改变IS6110 DNA指纹图谱。38KD蛋白抗原是一种磷酸转运蛋白,含有对结核杆菌特异的单抗定位的6个表位。有关报道38KD的诊断特异度在88%-100%

检验原理】 

本试剂盒采用PCR扩增和荧光探针相结合的方法,选择结核分枝杆菌IS611038KD抗原序列的特异保守区域作为检测靶基因区域,设计荧光检测的特异性引物探针,特异性探针5’标记为FAMIS611038KD)、VICHEX)(内参基因)荧光基团,3’淬灭基团为BHQ1。在PCR扩增过程中,特异性引物和探针分别与各自靶序列结合,扩增过程中通过Taq酶的DNA聚合酶活性和5’-3’ 外切酶活性实现了PCR产物形成与荧光信号累积的完全同步,通过一个反应液实现对样本核酸的定性检测。

储存条件及有效期】

储存条件:本试剂盒应避光储存于-18℃以下,有效期12个月;避免反复冻融(冻融次数不多于4次);

          开封后应放入-18℃以下冻存,若置于2~8℃保存,请于1周内使用。

运输条件:试剂盒置于含干冰的运输箱中可稳定保存5天。

生产日期、生产批号及失效日期见标签。

适用仪器】

ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7500Fast实时荧光定量PCR系统QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR仪、雅睿MA-6000荧光定量PCR仪、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR伯乐CFX Opus 96实时定量PCR

样本要求】

  1. 样本采集

痰液少者,让患者在晨起后漱口,然后做深呼吸数次,将痰从肺部咳出,收集在干净容器内尽快送检。痰液多者,则先嘱患者轻咳,将潴留在气管内陈旧痰咳出弃去;然后深呼吸数次从肺部深处咳新鲜痰液,立即送检。无痰者,可去医院进行雾化吸入法引痰,然后送检。

  1. 样本采集注意事项:样本在采集、保存和转移时避免污染。

样本安全性:所有样本均视为有潜在的感染性,操作时按国家相关标准执行。

  1. 存放

待测痰液样本在2−8℃保存不应超过24小时;−18℃以下保存不超过三个月;−70℃以下长期保存。应避免反复冻融。

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