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乙型流感核酸检测试剂盒(酶切探针恒温扩增法)

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所属分类:呼吸道疾病

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乙型流感核酸检测试剂盒(酶切探针恒温扩增法)

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产品简介

【产品名称】乙型流感病毒核酸检测试剂盒(酶切探针恒温扩增法)

【包装规格】50人份/

【预期用途】

本试剂盒用于体外定性检测鼻咽拭子和咽拭子样本中的乙型流感病毒核酸。

流行性感冒病毒(influenza virus),是正粘病毒科(Orthomyxoviridae)的代表种,简称流感病毒,是一种严重威胁人类健康的病原体,能广泛感染宿主,每年季节性的流行造成全球约6亿人感染,并导致250,000~500,000人死亡,其中乙型流感病毒是造成主要感染和死亡的原因之一[1]乙型流感病毒Influenza B virus),又称B型流感病毒(IVB),单股负链RNA,根据其抗原特性HA1区的核苷酸序列,可将其分为两大谱系,代表毒株为B/Yamagata/16/88B/Victoria/2/87(5)[2]。乙型流感病毒一般宿主特异性较强,目前发现其只能感染人和海豹,一般不引起世界范围内的大流行,但是它能够引起地区性季节性的流行[3]。乙型流感病毒可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途径传播,感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等,多数伴有严重的肺炎,严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡,病死率很高[4]。因此临床上急需一种简单、准确、快速的诊断乙型流感病毒的方法,为临床的用药和诊断提供指导依据。

本试剂盒检测结果不作为乙型流感病毒感染诊断的唯一指标,须结合患者临床表现和其他检测结果综合分析。

【检测原理】

本试剂盒采用酶切探针恒温扩增技术(Enzymatic Probe Isothermal AmplificationEPIA),针对IVB的高度保守区域设计特异性引物与含RNA碱基的探针(rProbe),同时加入Bst酶、RNaseH和逆转录酶等,其中rProbeRNA碱基左、右两端分别标记荧光基团和淬灭基团。首先将提取的RNA逆转录为cDNA,利用Bst酶的DNA聚合酶活性和链置换活性扩增待测靶标,RNaseH酶可切割靶标-探针杂交链上的RNA碱基,使得rProbe的荧光基团和淬灭基团分离从而发出荧光。此外,残留的rProbe RNA碱基左侧片段可作为引物继续延伸形成产物,使得产物进一步累积。荧光信号随着产物的形成不断累积,从而实现对目标核酸的检测。体系中以重组的松树叶绿体基因质粒作为外源内参,作为对试剂以及操作本身的质控,避免假阴性。

【储存条件及有效期】

本试剂盒于-18℃以下避光保存,有效期暂定9个月。开封、反复冻融次数不得多于4次,在-18℃以下的避光条件运输,可稳定保存5天。

生产日期、生产批号及失效日期见包装标签。

【适用仪器】

ABI 7500荧光定量PCR仪、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统,实时荧光恒温检测系统Easy Amp HWTS1600

【样本要求】

  1. 样本采集
    1. 鼻咽拭子

用带有聚酯纤维尖端的拭子从前鼻孔进入,沿着下鼻道底部慢慢向后深入。当拭子顶部到达鼻咽腔后壁时(有碰壁的触感),将拭子静置片刻(约3秒),然后轻轻旋转一周,慢慢取出拭子,并将其放入管中。 用手折断塑料柄,使拭子浸入采样溶液中,并拧紧瓶盖。经验证,可用生理盐水或Hank’s液保存液保存鼻拭子样本。

    1.  咽拭子

用聚酯纤维头拭子适度用力多次抹擦悬雍垂(腭垂或小舌)后部咽后壁及双侧扁桃体,避免触及舌部,取出后置采样管,折断手接触部位的塑料柄,使拭子浸泡至采样液中,旋紧管盖。经验证,可以使用生理盐水或Hank’s液等成分的保存液保存咽拭子样本。

  1. 存放

采集的样本应尽量在4h内送检,待测样本在2~8保存不应超过一周;24小时内无法检测的样本则应置于-18以下保存,保存时间不超过3个月,-70以下长期保存

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