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人EGRF基因29种突变检测试剂盒

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所属分类:药物基因个性化检测

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人EGRF基因29种突变检测试剂盒

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产品简介

产品名称 EGFR基因29种突变检测试剂盒(荧光PCR法)

包装规格 16人份/盒、32人份/

预期用途

本检测试剂盒用于体外定性检测人非小细胞肺癌患者样本中的EGFR基因18-21号外显子的常见突变(详见表1)。

肺癌已成为全球癌症死亡的首要原因,严重威胁人类健康。在肺癌患者中,非小细胞肺癌约占80%EGFR是目前非小细胞肺癌治疗最重要的分子靶点,EGFR的磷酸化具有促肿瘤细胞生长、分化、侵袭、转移、抗凋亡以及促进肿瘤血管生成等作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)可通过抑制EGFR自身磷酸化而阻断EGFR信号传导通路,从而抑制肿瘤细胞的增殖、分化、促进肿瘤细胞凋亡、减少肿瘤新生血管等,从而实现肿瘤的靶向治疗[1]。大量研究表明,EGFR-TKI的治疗疗效与EGFR基因突变状况密切相关,可特异性抑制具有EGFR基因突变的肿瘤细胞的生长[2~3]EGFR基因定位于第7号染色体短臂(7p12),全长200Kb,由28个外显子组成,突变区域主要位于18~21号外显子,其中外显子19上的746~753密码子缺失突变约占突变的45%,外显子21上的L858R突变约占40%~45%[4]。在《NCCN非小细胞肺癌诊断治疗指南》明确指明,在进行EGFR-TKI用药前,需进行EGFR基因突变检测。本检测试剂盒用于指导表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)类药物的用药,为非小细胞肺癌患者的个体化医疗提供依据。本试剂盒仅用于对非小细胞肺癌患者EGFR基因常见突变的检测,其检测结果仅供临床参考,不应作为患者个体化治疗的唯一依据,临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。

1 可检测突变型

Mutation

Exon

Base Change

Cosmic ID

Mutation

Exon

Base Change

Cosmic ID

19del

19

2235-2249del15

6223

19del

19

2239-2247del9

6218

2235-2252>AAT

13551

2239>2253del15

6254

2236-2253del18

12728

2239-2256del18

6255

2237-2251del15

12678

2239-2248>C

12382

2237-2254del18

12367

2239-2258>CA

12387

2237-2255>T

12384

2240-2251del12

6210

2236-2250del15

6225

2240-2257del18

12370

2238-2255del18

6220

2240-2254del15

12369

2238-2248>GC

12422

2239-2251>C

12383

2238-2252>GCA

12419

 

 

L858R

21

2573T>G

6224

3Ins20

20

2307-2308insGCCAGCGTG

12376

T790M

20

2369C>T

6240

2319-2320insCAC

12377

G719A

18

2156G>C

6239

2310-2311insGGT

12378

G719S

18

2155G>A

6252

L861Q

21

2582T>A

6213

G719C

18

2155G>T

6253

S768I

20

2303G>A

6241

 

检验原理

本检测试剂盒采用PCR富集液、ARMSAmplification refractory mutation system)技术与Taqman探针相结合方法检测L858R19delEGFR常见突变型。通过对突变位点的PCR富集,进一步提高了检测的分辨率、灵敏度。Taqman探针分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ2。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的53’的外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号。PCR富集液通过酶切作用,降低了野生型背景序列,进一步提高了检测的分辨率、灵敏度。ARMS方法的特点通过无3’-5外切酶活性的Taq DNA Polymerase,可特异性的识别引物的3’末端,只有引物3’末端完全配对时,才能正常扩增发生突变位点的片段,当引物3’末端发生错配时,不能有效的扩增。因此,采用此种方法可选择性的扩增突变序列,Taqman探针与扩增产物结合,从而鉴定出突变目的序列。

内参反应液选择的检测区域是人EGFR基因外显子2上相对保守的区段,约120bp,作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控,即便DNA有降解,通过内参能够真实地反应体系中基因有效的DNA 量。

检测体系中含有一定比例的dUTPdNTP和尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶),这种酶(也称为尿嘧啶-N-糖基化酶或UNG酶)可以打断含有dUTPPCR产物,从而有效的防止PCR污染。

储存条件及有效期

本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下,有效期为9个月(请于有效期内使用)。开封后,反复融次数不得多于4次,在-18℃以下的避光条件下运输,可稳定保存5天。

生产日期及失效日期见标签。

适用仪器

ABI7500荧光定量PCRABI7300荧光定量PCR仪、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统LightCycler® 480荧光定量PCR系统、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪。

样本要求

由于肿瘤的异质性,所采集的临床样品往往会混有正常组织细胞,不同类型样品正常细胞混杂程度不同,而且提取的DNA纯度和质量也因样品类型而改变,尤其是用福尔马林固定的石蜡切片样品,福尔马林会对DNA有交联和降解作用,因此请按下面推荐样品类型顺序收集样品并提取DNA用于检测,客户可根据临床实际样品的情况进行选择。

1、推荐样品类型顺序:新鲜肿瘤组织>冰冻病理切片>石蜡包埋病理组织或切片>血浆或血清。

2、从新鲜病变组织中取样应确定含有肿瘤组织,建议含量在30%以上。

3、石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞(建议含量在30%以上),所取部分尽量在蜡块中部,石蜡切片数应不少于3张,厚度在5-10 μm。且手术切除的组织应尽快在4-10%的福尔马林中固定,固定时间以8-24 小时为宜;包埋前应进行彻底脱水。所用石蜡包埋病理组织或切片样品一般请选择保存尚未超过3年的样品。

4、取患者不少于5 ml 外周血样本于EDTA 抗凝管中。轻微颠倒混匀后,4 小时以内完成血浆分离工作;若将外周血置于分离胶促凝管中(金黄色管盖),轻微颠倒混匀后,静置凝固后离心获得血清。

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