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结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(酶切探针恒温扩增法)-冻干

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结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(酶切探针恒温扩增法)-冻干

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产品简介

【产品名称】

结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(酶切探针恒温扩增法)

【包装规格】 48人份/

【预期用途】

本试剂盒用于体外定性检测结核分枝杆菌感染的具有肺结核相关体征/症状和X线检查结果的疑似结核病患者、其他需要进行结核分枝杆菌感染诊断或鉴别诊断者的痰液样本中的结核分枝杆菌核酸。

结核分枝杆菌(Mycobacterium culosis),简称结核杆菌(Tubercle bacillus,简称TB),是专性需氧的一类细菌,抗酸染色阳性。无鞭毛,有菌毛,有微荚膜但不形成芽孢,其细菌壁既没有革兰阳性菌的磷壁酸,也没有革兰阴性菌的脂多糖。对人致病的结核分枝杆菌现一般认为有人型、牛型、非洲型。其致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引起的炎症,菌体成分和代谢物质的毒性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有关。致病物质与荚膜、脂质和蛋白质有关。结核分枝杆菌可通过呼吸道、消化道或皮肤损伤侵入易感机体,引起多种组织器官的结核病,其中以通过呼吸道引起肺结核为最多。多发生于儿童,多表现为低热,盗汗,少量咯血等症状。继发性感染主要表现为低热,盗汗,咯血等症状;长呈慢性发病,少数急性发作。结核病是全球人类十大死因之一。2018 年,全世界大约有1000 万人感染过结核分枝杆菌,其中大约有160 万人死亡。

IS6110是由Thierry等人于1990年在结核分枝杆菌中发现的一段插入的核苷酸顺序。IS6110存在于结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌、牛分枝杆菌和卡介苗基因中的一段具有多个拷贝的序列。IS6110在其存在的菌株中是比较稳定的,在菌株产生耐药突变时都不会改变IS6110 DNA指纹图谱。38KD蛋白抗原是一种磷酸转运蛋白,含有对结核杆菌特异的单抗定位的6个表位。有关报道38KD的诊断特异度在88%-100%

实验操作人员应接受过基因扩增或分子生物学方法检测的专业培训,具备相关的实验操作资格,实验室应具备相应的生物安全防护条件。本试剂盒检测结果不作为患者结核分枝杆菌感染诊断的唯一指标,须结合患者临床表现和其他检测结果综合分析。

【检测原理】

本试剂盒采用酶切探针恒温扩增技术(Enzymatic Probe Isothermal AmplificationEPIA),针对结核分枝杆菌的高度保守区域(IS611038KD)设计特异性引物与含RNA碱基的探针(rProbe),同时加入Bst酶及RNaseH等,其中rProbeRNA碱基左、右两端分别标记荧光基团和淬灭基团。在恒定温度下利用Bst酶的DNA聚合酶活性和链置换活性扩增待测靶标,RNaseH酶可切割靶标-探针杂交链上的RNA碱基,使得rProbe的荧光基团和淬灭基团分离从而发出荧光。此外,残留的rProbe RNA碱基左侧片段可作为引物继续延伸形成产物,使得产物进一步累积。荧光信号随着产物的形成不断累积,从而实现对目标核酸的检测。

体系中以重组的松树叶绿体基因假病毒作为外源内参,作为对试剂以及操作本身的质控,避免假阴性。

【储存条件及有效期】

  1. 未开封的试剂盒:应在避光、温度不高于30℃下储存,有效期12个月。
  2. 冻干的阳性对照品和内参对照品复溶后立即进行检测,未用完的阳性对照品和内参对照品应避光储存于-15℃以下,有效期为1周,避免反复冻融(应不超过2次)。
  3. 运输条件: 低于37℃可稳定运输1个月。
  4. 生产日期、生产批号及失效日期见包装标签。

【适用仪器设备】

ABI 7500荧光定量PCR仪、上海宏石SLAN-96P荧光定量PCR仪、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、实时荧光恒温检测系统Easy Amp HWTS1600

【样本要求】

  1. 适用样本类型:痰液。

2. 样本采集:痰液少者,让患者在晨起后漱口,然后指导或辅助其深咳嗽,将痰从肺部咳出,收集在干净容器内尽快送检。痰液多者,则先嘱患者轻咳,将潴留在气管内陈旧痰咳出弃去;然后指导或辅助其深咳嗽,收集肺部深处的新鲜痰液,立即送检。无痰者,可去医院进行雾化吸入法引痰,然后送检。

3. 注意事项:样本在采集、保存和转移时避免污染;

样本采集前24小时内禁止使用呼吸道外用药(药膏、喷剂、滴剂);

所有样本均视为有潜在的感染性,操作时按国家相关标准执行。

  1. 存放:待测样本可2-8℃保存24小时,-15℃以下保存不超过6个月,-70℃以下长期保存。待测冷冻样本提取应当在样本完全融解后混匀进行,应避免反复冻融。提取后的DNA样本若不用于即时检测,应放置于-15℃以下,保存期限不超过6个月,反复冻融次数不超过4次。
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