【产品名称】 人ROS1融合基因突变检测试剂盒（荧光PCR法）

【包装规格】 20人份/盒、50人份/盒

【预期用途】

本检测试剂盒用于体外定性检测人非小细胞肺癌患者样本中ROS1融合基因14种突变型别（表1）。其检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。

ROS1是胰岛素受体家族的一种跨膜酪氨酸激酶，ROS1融合基因被证实为又一重要的非小细胞肺癌驱动基因，作为新的独特分子亚型代表，ROS1融合基因在NSCLC中发生率约为1%～2%^[1,2]。ROS1主要在其外显子32、34、35和36处发生基因重排，其与CD74、EZR、SLC34A2、SDC4等基因发生融合后，会持续激活ROS1酪氨酸激酶区域，异常活化的ROS1激酶可激活下游RAS/MAPK/ERK、PI3K/Akt/mTOR、JAK3/STAT3等信号通路，从而参与肿瘤细胞的增殖、分化与转移，引起癌症的发生^[2]。ROS1融合突变中，CD74-ROS1约占42%，EZR约占15%，SLC34A2约占12%，SDC4约占7%^[3]。研究表明，ROS1激酶催化区的ATP结合位点与ALK激酶催化区的ATP结合位点二者同源性高达77%^[4]，因此ALK酪氨酸激酶小分子抑制剂克唑替尼（crizotinib）等在治疗ROS1发生融合变异的NSCLC中具有明显疗效^[5,6]。因此，检测ROS1融合突变情况是指导 Crizotinib 类药物用药的前提和基础。本检测试剂盒用于指导ROS1抑制剂类药物的用药，为非小细胞肺癌患者的个体化医疗提供依据。

表1 可检测的突变型

【检验原理】

本试剂盒采用荧光探针实时PCR技术，针对ROS1融合基因14种融合突变及内参基因靶序列，设计荧光检测的特异性的引物探针，特异性探针5’标记为FAM荧光基团（14种融合突变）和HEX（VIC）荧光基团（内参），3’标记为BHQ1淬灭基团。提取的RNA经逆转录为cDNA，在PCR扩增过程中，特异性引物和探针分别与各自靶序列结合，当Taq酶遇到结合在靶序列上的探针时，发挥5’端外切酶功能，使报告荧光基团和淬灭基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步，通过四个反应液实现对样本中14种融合突变的定性检测及内参的检测。

同时引入内源内参质控，作为对试剂、RNA质量以及操作本身的质控，即便RNA有降解，通过内参能够真实地反应体系中有效的RNA量。

【储存条件及有效期】

本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下，有效期为9个月（请于有效期内使用）。开封后，反复融次数不得多于4次，在-18℃以下的避光条件下运输，可稳定保存5天。

生产日期及失效日期见标签。

【适用仪器】

ABI7500荧光定量PCR仪、ABI7500Fast实时荧光定量PCR系统、QuantStudio®5实时荧光定量PCR系统、宏石SLAN-96P全自动医用PCR分析系统、LightCycler® 480荧光定量PCR系统、杭州博日FQD-96A荧光定量PCR仪、雅睿MA-6000荧光定量PCR仪、伯乐BioRad CFX96实时荧光定量PCR仪和伯乐CFX Opus 96实时定量PCR仪。

【样本要求】

1. 样本来源：石蜡包埋病理组织或切片样本。

石蜡包埋病理组织或切片样品应确定含有肿瘤病变细胞（建议含量在30%以上），所取部分尽量在蜡块中部，石蜡切片数应不少于3张，厚度在5-10 μm。且手术切除的组织应尽快在4-10%的福尔马林中固定，固定时间以8-24 小时为宜；包埋前应进行彻底脱水。建议选择未超过2年的NSCLC石蜡包埋组织样本。

2. 样本采集注意事项：样本在采集、保存和转移时避免污染。

样本安全性：所有样本均视为有潜在的感染性，操作时按国家相关标准执行。